革蘭氏染色液試劑盒的使用步驟

革蘭氏染色液試劑盒是微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室的基礎(chǔ)工具，用于通過(guò)細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)差異區(qū)分革蘭氏陽(yáng)性（G?）和陰性（G?）細(xì)菌，是細(xì)菌分類鑒定的重要步驟。

革蘭氏染色液試劑盒的使用步驟：

1、涂片固定：菌液涂片后火焰固定（1-2次），避免過(guò)熱破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)。

2、初染：滴加結(jié)晶紫染色液，染色1分鐘，水洗。

3、媒染：滴加碘液，染色1分鐘，水洗。

4、脫色：滴加脫色液，搖動(dòng)玻片10-60秒（根據(jù)涂片厚度調(diào)整），至無(wú)紫色脫落，水洗。

5、復(fù)染：滴加沙黃染色液，染色1分鐘，水洗后晾干或吸干水分。

6、鏡檢：100倍油鏡觀察，陽(yáng)性菌呈紫色，陰性菌呈紅色。

關(guān)鍵控制點(diǎn)：

脫色程度：過(guò)度脫色可能導(dǎo)致陽(yáng)性菌誤染為陰性菌，脫色不足則陰性菌可能呈紫色。

菌齡影響：陽(yáng)性菌培養(yǎng)時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或死亡后，細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)破壞，可能呈陰性反應(yīng)。使用注意事項(xiàng)：

1、脫色時(shí)間是實(shí)驗(yàn)成敗的關(guān)鍵，過(guò)短會(huì)導(dǎo)致假陽(yáng)性，過(guò)長(zhǎng)則會(huì)導(dǎo)致假陰性。

2、涂片需均勻、薄厚適中，太厚會(huì)影響脫色和觀察。