動(dòng)物模型誘導(dǎo)——DSS 誘導(dǎo)結(jié)腸炎模型

炎癥性腸病 

硫酸葡聚糖鈉鹽 

DSS誘導(dǎo)結(jié)腸炎的作用過(guò)程涉及多個(gè)環(huán)節(jié)的協(xié)同作用，DSS誘導(dǎo)導(dǎo)致腸道屏障損傷、免疫炎癥激活、腸道菌群紊亂、抑制血液凝固和血小板聚集，從而在體內(nèi)引起結(jié)腸炎。動(dòng)物表現(xiàn)出明顯的體重減輕、稀便、便血以及粒細(xì)胞浸潤(rùn)現(xiàn)象，在臨床癥狀和病理特征上與人類(lèi)的潰瘍性結(jié)腸炎極其相似^[2][3][4]。

圖1 DSS 誘發(fā)的結(jié)腸炎示意圖^[5]

可用于結(jié)腸炎發(fā)生機(jī)制和藥物治療藥效的研究。

動(dòng)物自由飲用DSS水溶液，實(shí)驗(yàn)操作簡(jiǎn)單易行、可重復(fù)性強(qiáng)，可控性高，造模效率高。

DSS可用于急性結(jié)腸炎、慢性結(jié)腸炎，還可以聯(lián)合AOM構(gòu)建結(jié)腸炎相關(guān)性癌癥（CAC）模型建立。

小鼠、大鼠、斑馬魚(yú)、豬、果蠅等不同種屬動(dòng)物。

DSS可被自然生態(tài)系統(tǒng)降解，對(duì)環(huán)境安全。

（1）分子量

更佳范圍：36,000-50,000 Da，平衡黏膜滲透性與局部作用效果。

避免選擇：

低分子量（如4,000 Da）— 易被腸道吸收，炎癥誘導(dǎo)不充分;

高分子量（如500,000 Da）— 黏膜穿透性差，效果不穩(wěn)定^[6]。

試劑推薦：硫酸葡聚糖鈉鹽（結(jié)腸炎造模用DSS）。

（2）濃度設(shè)計(jì)

急性模型：2%-5% DSS，持續(xù)5-7天（小鼠）或7-10天（大鼠）。

慢性模型：1%-3% DSS，采用循環(huán)給藥（如7天DSS+14天水，重復(fù)2-3周期）^[7]。

特殊物種：斑馬魚(yú)需低濃度（如0.25%），避免高毒性^[8]。

注意事項(xiàng)：

（1）使用6-8周免疫系統(tǒng)成熟動(dòng)物。

（2）雌雄分籠（性別可能影響炎癥反應(yīng)，雄鼠可能比雌鼠更敏感）。

（1）臨床指標(biāo)

體重變化：每日記錄，體重下降率是造模成功與否的重要指標(biāo)，通常急性結(jié)腸炎模型下降10%-20%。

疾病活動(dòng)指數(shù)（DAI）：綜合體重、便血、腹瀉評(píng)分。

（2）病理學(xué)檢查

HE染色：評(píng)估黏膜潰瘍、隱窩結(jié)構(gòu)、炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。

結(jié)腸長(zhǎng)度：結(jié)腸縮短程度與炎癥嚴(yán)重性正相關(guān)。

（3）指標(biāo)檢測(cè)

炎癥因子：qPCR/ELISA檢測(cè)TNF-α、IL-6、IL-1β。

腸道通透性：FITC-葡聚糖灌胃后測(cè)血清熒光值。

微生物組：16S rRNA測(cè)序分析菌群失調(diào)。

有些動(dòng)物的敏感度低，甚至飲用 DSS的第 5 天才出現(xiàn)體重下降。若是第 7 天還未出現(xiàn)明顯癥狀，建議重新提高DSS濃度。

降低DSS濃度（如5%→3%），或縮短給藥時(shí)間。可以適當(dāng)添加支持措施（如軟飼料、生理鹽水補(bǔ)液）。

檢查DSS溶解是否充分（需磁力攪拌避光溶解）。確認(rèn)動(dòng)物自由飲水（水瓶無(wú)泄漏，每日更換新鮮DSS溶液）。提高DSS濃度。延長(zhǎng)給藥周期，可持續(xù)給藥7-10天。

DSS是葡聚糖聚合物，分子量是平均分子量，每個(gè)批次之間會(huì)存在分子量的差異，而分子量對(duì)結(jié)腸炎造模有影響。通常批次間比較穩(wěn)定，但少部分也會(huì)存在差異。建議根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，購(gòu)買(mǎi)足夠的同一批次的產(chǎn)品，或者使用批次之前進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)。

盡量使用相同性別、大小、體重的小鼠（建議以6-8周，體重18g以上的小鼠為建模對(duì)象），保證每籠小鼠數(shù)量在3-5只，避免過(guò)多，確保每瓶DSS飲用水足量，且不可阻塞。

實(shí)驗(yàn)組別：通過(guò)口服葡聚糖硫酸鈉（DSS）（Solarbio Life Sciences，北京，中國(guó)）在SD大鼠中誘導(dǎo)結(jié)腸炎^[9]。

結(jié)腸炎模型：通過(guò)在飲用水中給予5% DSS 10天在大鼠中誘導(dǎo)結(jié)腸炎。

 圖2 CM-AcMSC能有效減輕DSS誘導(dǎo)的結(jié)腸炎模型大鼠的體重減輕和DAI，n=15。

(A)每天測(cè)量體重。(B)在發(fā)病過(guò)程中測(cè)定DAI。

圖3 CM-AcMSC顯著改善DSS誘導(dǎo)的結(jié)腸炎模型大鼠的結(jié)腸組織病理學(xué)特征，n=15。

(A)大鼠結(jié)腸的宏觀方面，結(jié)腸組織的石蠟切片分別用蘇木精和伊紅（H&E）染色，結(jié)腸組織的石蠟切片用高碘酸-希夫（PAS）染色。

(B)測(cè)量每組結(jié)腸的長(zhǎng)度。

(C)根據(jù)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)參數(shù)評(píng)價(jià)組織學(xué)損傷評(píng)分。

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